Метка эритроцитов. Непосредственно перед исследованием из вены пациента берут 20 мл крови в стерильный пластикатный мешок или завальцованный флакон емкостью 100 мл, куда предварительно наливают 1000 ЕД гепарина ЕД в объеме 0,2 мл. К взятой крови добавляют раствор натрия хромата, 51Cr. Инкубация эритроцитов изотопом производят в мечение 30 мин при комнатной температуре, периодически осторожно перемешивая взвесь клеток. По окончании метки кровь центрифугируют при 1000 об/мин в течение 15 минут, затем производят наиболее полное удаление плазмы. Меченые эритроциты однократно отмывают путем добавления в пластикатный мешок или завальцованный флакон 100 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. Взвесь эритроцитов осторожно перемешивают, центрифугируют в течение 15 мин при тех же условиях, надосадочную жидкость удаляют. Перед реинфузией взвесь эритроцитов разбавляют 0,9% раствором натрия хлорида.
Метка лейкоцитов или тромбоцитов. Раствор натрия хромата, 51Cr добавляют к выделенной лейкоцитарной или тромбоцитарной массе из расчета 0,07-0,1 МБк на 1 мл массы. Смесь осторожно перемешивают и инкубируют при температуре 37,5 °С в течение 30 мин. После окончания инкубации клеточную взвесь лейкоцитов центрифугируют при 760 об/мин в течение 15 мин, а клеточную взвесь тромбоцитов при 3200 об/мин также в течение 15 мин. Надосадочную жидкость, содержащую не связавшийся с клетками хром-51, удаляют и замещают равным объемом плазмы.
Активность вводимого пациенту раствора составляет: при определении объема циркулирующих или депонированных эритроцитов, продолжительности жизни эритроцитов, лейкоцитов или тромбоцитов - 3,7 МБк, а при выявлении скрытых желудочно-кишечных геморрагий - 11,1 МБк.
Методы исследования
Определение объема циркулирующих эритроцитов. Эритроциты, меченные хромом-51, вводят внутривенно пациенту. Часть их используют для приготовления стандарта (1 мл суспензии эритроцитов разводят в 100 мл 0,1%-ного раствора стабильного хромата натрия). Через 15 мин после инъекции из локтевой вены противоположной руки пациента гепаринизированным шприцом забирают 10-15 мл крови, из которой 2 мл используют для определения гематокрита, а остальную порцию - для радиометрии в колодезном счетчике.
Объем циркулирующих эритроцитов рассчитывают по следующей формуле:
ОЦЭ = [Nct x D x V x Ht] / Nob
где Nct - активность стандарта (имп/мин/мл);
D - разведение (100);
V - объем введенной суспензии в мл;
Ht - исправленный гематокрит;
Nob - активность образца крови на 15 мин (имп/мин/мл)
Для определения объема депонированных эритроцитов берут пробы крови через 10, 20, 40 и 60 мин после внутривенного введения меченных хромом-51 эритроцитов. В пробе на 10 мин (быстро циркулирующий объем эритроцитов) и в пробе, взятой в период плато радиоактивности крови (t) по вышеприведенной формуле рассчитывается ОЦЭ. Различие показателей ОЦЭ на 10 минуте и в момент t - соответствует объему депонированных эритроцитов в мл.
Определение продолжительности жизни эритроцитов. Через 2, 3, 7, 10 сут после внутривенного введения меченных хромом-51 эритроцитов из вены пациента берут 12 мл крови в гепаринизированные пробирки. Сразу после взятия крови 10 мл ее переносят в счетную пробирку и гемолизируют сапонином. Радиометрию проб крови производят в колодезном счетчике. Активность пробы, взятой через 2 дня, принимают за 100%, а остальных образцов - выражают в процентах к этой пробе. Полученные величины наносят на полулогарифмическую систему координат, в которой на оси абсцисс откладывают время в сутках в линейном масштабе, а на оси ординат - радиоактивность в процентах в логарифмическом масштабе. По усредненной прямой находят время снижения радиоактивности на 50% (Тбиол), что и является показателем продолжительности жизни эритроцитов, в норме которой составляет 22-31 день.
Определение желудочно-кишечных кровотечений. В течение 1 ч после внутривенного введения меченных хромом-51 эритроцитов и через каждые 2 суток, в течение 8 суток из вены противоположной руки пациента берут по 10 мл крови в гепаринизированные пробирки. После введения меченых эритроцитов больной собирает кал примерно суточными порциями, которые помещают в смеситель с крышкой и перемешивают с добавлением воды. Объем полученной в смесителе взвеси кала измеряют с помощью мерной посуды.
*) Пробы крови и кала в объеме по 10 м радиометрируют в колодезном счетчике.
Расчет количества крови в кале проводят по следующей формуле:
Акр = Nkal x V / Nkr
где: Акр - количество крови в исследуемом кале (мл);
Nkal - активность 1 мл взвеси кала (имп/мин);
V - общее количество взвеси исследуемого кала (мл);
Nkr - активность 1 мл крови в начале изучаемого периода (имп/мин)
Определение продолжительности жизни лейкоцитов или тромбоцитов. Через 1 час после реинфузии меченых клеток каждые 2 часа в течение 1 суток берут 3-4 пробы крови по 5 мл из локтевой вены противоположной руки пациента. Затем ежедневно в течение 7-8 суток забор проб крови повторяют. Забор крови осуществляют до фактически полного исчезновения радиоактивности в кровяном русле. Этот период времени рассматривают как продолжительность жизни клеток. В норме для тромбоцитов она составляет 7-8 суток, а для лейкоцитов - 12-13 суток.
*) Примечание. При наличии колодезного счетчика с большой емкостью кристалла (500 мм3) радиометрируют весь объем суточной порции кала, избегая процедуру измерения его объема. Тогда достаточно радиоактивность всего объема кала разделить на радиоактивность 1 мл крови для получения величины суточной кровопотери.
Лучевые нагрузки на органы и все тело пациента при использовании препарата "Натрия хромата, 51Cr" (в зависимости от носителя нуклида)
Органы и системы | Поглощенная доза, мГр/МБк |
Селезенка | 1,7-6,0 |
Гонады | 0,1 |
Все тело (эффективная эквивалентная доза) мЗв/МБк | 0,1-0,5 |