Флакон с лиофилизатом содержит 1,77 мг натрия /флакон (0,354 мг/мл), что следует принять во внимание у пациентов, которые находятся на гипонатриевой диете.
Применение препарата может вызвать реакции повышенной чувствительности, включая анафилаксию. На случай их возникновения необходимо иметь в наличии необходимые препараты и оборудование для оказания немедленной медицинской помощи.
Препарат должен готовиться и применяться только квалифицированным персоналом в отделении ядерной медицины в условиях асептики. Введение радиофармацевтических препаратов создает риски внешнего радиационного загрязнения мочой, рвотными массами и т.д. Должны соблюдаться меры предосторожности при работе с радиоактивными материалами, а также условия асептики при работе с препаратом. Готовый препарат хранят в соответствии с национальными правилами по обеспечению радиационной безопасности. Любой неиспользованный радиоактивный материал утилизируют в соответствии с действующим законодательством.
Перед применением препарата, для подтверждения качества, необходимо провести определение радиохимической чистоты препарата по следующей методике:
Определение радиохимической чистоты
В приготовленном растворе эксаметазима для инъекций могут присутствовать три потенциальные примеси. Это вторичный комплекс 99mТс-эксаметазима, свободный пертехнетат и восстановленный-гидролизованный 99mТс. Для полного определения радиохимической чистоты раствора препарата необходимо использовать две хроматографические системы: бутан-2-он (МЭК) и 0,9% раствор натрия хлорида.
Пробы испытуемого раствора наносят иглой примерно в 2,5 см от нижнего края двух хроматографических полосок GMCP-SA (Glass Microfiber Chromatography Paper impregnated with Silicic Acid ) (2 cm (± 2 мм) x 20 см). После чего полоски сразу помещают в приготовленные хроматографические камеры, которые содержат свежий растворитель с толщиной слоя 1 см, для проведения восходящей хроматографии. После перемещения фронта растворителя на 14 см от старта, полоски вынимают из хроматографической камеры, высушивают и с использованием соответствующего оборудования определяют радиоактивность.
Результаты хроматографирования
Система 1 (GMCP-SA: бутан-2-он (МЭК))
Вторичный комплекс 99mТс-эксаметазима и восстановленный-гидролизованный 99mТс остаются на линии нанесения проб. Липофильный комплекс 99mТс-эксаметазима и пертехнетат перемещаются с фронтом (Rf 0,8-1,0).
Система 2 (GMCP-SA: 0.9% натрия хлорид)
Липофильный комплекс 99mТс-эксаметазима. вторичный комплекс 99mТс-эксаметазим и восстановленный-гидролизованный 99mТс остаются на старте. Пертехнетат перемещается с Rf0,8-1,0.
Рассчитать активность (%), обусловленную комплексом 99mТс-эксаметазима и восстановленным-гидролизованным 99mТс по хроматограммам Системы 1 (А %). Рассчитать активность (%), обусловленную пертехнетатом по хроматограммам Системы 2 (В %).
Радиохимическая чистота (как процент липофильного комплекса 99mТс-эксаметазима) определяется следующим образом: 100 - (А % + В %), где А% - уровень вторичного комплекса 99тmТс-эксаметазима и восстановленного-гидролизованного 99mТс;
В % - уровень пертехнетата.
При отборе проб для проведения теста в течение 30 минут после приготовления раствора препарата можно ожидать, что радиохимическая чистота составит не менее 80 %. Тест по определению радиохимической чистоты следует проводить сразу после отбора проб.
Методика выделения лейкоцитов и последующее их мечение in vitro 99тТс-эксаметазимом
Все операции проводить с соблюдением методов асептики.
1.В два 60 мл пластиковых негепаринизированных шприца набрать по 9 мл смеси, состоящей из раствора лимонной кислоты - цитрата декстрозы (см. «Примечания»).
2.В каждый из шприцев, используя иглу-бабочку (19G), отобрать по 51 мл крови пациента. Закрыть шприцы стерильными наконечниками.
3.Подготовить 5 универсальных пробирок и внести в них по 2 мл раствора гидроксиэтилкрахмала.
4.Не вставляя иглу в шприц, перенести из шприцев по 20 мл крови в каждую из 5 универсальных пробирок, содержащих гидроксиэтилкрахмал. Оставшиеся 20 мл крови перенести в пробирку, не содержащую гидроксиэтилкрахмал.
Рекомендация: для предупреждения образования пузырьков и вспенивания кровь осторожно сливать по стенкам пробирок.
5.Аккуратно перемешать кровь и гидроксиэтилкрахмал однократным переворачиванием пробирки. Снять крышку с универсальной пробирки и удалить образовавшиеся пузырьки воздуха с помощью стерильной иглы. Надеть крышку и дать пробиркам отстояться в течение 30-60 минут для оседания эритроцитов.
Рекомендация: скорость оседания эритроцитов зависит от состояния здоровья пациента. Процесс можно считать завершенным, когда эритроциты осядут минимум на половину всего объема пробирки.
6.Параллельно, вторую пробирку, свободную от гидроксиэтилкрахмала и содержащую 20 мл цельной крови, центрифугируют при 2000 g в течение 10 минут. Полученный супернатант содержит свободную от клеток плазму и раствор лимонной кислоты – цитрата декстрозы и хранится при комнатной температуре. Супернатант используют в качестве среды при мечении лейкоцитов.
7.После завершения процесса осаждения эритроцитов в первой пробирке осторожно, не допуская попадания эритроцитов, перенести 15 мл надосадочной жидкости (мутная жидкость бледно-желтого цвета), состоящей из плазмы с лейкоцитами и тромбоцитами, в чистые универсальные пробирки.
Рекомендация: при отборе проб не следует пользоваться иглой во избежание случайного повреждения клеток.
8.Полученную надосадочную жидкость центрифугировать при 150 g в течение 5 минут для получения супернатанта, состоящего из плазмы с тромбоцитами, и осадка - «смеси» лейкоцитов.
9.Максимально возможное количество супернатанта перенести в чистые универсальные пробирки и центрифугировать при 2000g в течение 10 минут для получения дополнительной надосадочной жидкости, свободной от клеток плазмы. Полученная надосадочная жидкость содержит гидроксиэтилкрахмал и будет использована для промывания клеток после введения в них метки.
10.Параллельно, осторожно постукивая и вращая пробирку, отделить от стенок осадок, представляющий собой «смесь» лейкоцитов. Шприцем без иглы, поместить клетки в одну пробирку и. используя тот же шприц, добавить 1 мл супернатанта, полученного в пункте 6. Осторожно вращая пробирку, ресуспендировать клетки.
11.Используя методику, изложенную в пункте «Приготовление препарата», подготовить раствор 99mТс-эксаметазима, путем добавления из генератора 99mТс 5 мл элюата с содержанием 99mТcO4 - 500 МБк (13,5 мКи).
12.Немедленно добавить 4 мл приготовленного раствора 99mТс-эксаметазима в «смесь» лейкоцитов и супернатанта (см. пункт 10).
13.Осторожно вращая пробирку, перемешать содержимое и оставить на 10 минут при комнатной температуре.
14.При необходимости немедленно нанести пробы на хроматографические полоски для проведения оценки радиохимической чистоты 99mТс-эксаметазима в соответствии с инструкциями, изложенными в пункте «Определение радиохимической чистоты».
15.Для того чтобы остановить процесс введения меток в клетки, по окончании 10 минут в пробирку осторожно добавить 10 мл надосадочной жидкости (см. пункт 9), свободной от клеток и содержащей гидроксиэтилкрахмал. Осторожным вращательным движением перемешать содержимое пробирки.
16.Центрифугировать при 150 g в течение 5 минут.
17.Отобрать и сохранить надосадочную жидкость.
Рекомендация. Необходимо, чтобы на этой стадии вся надосадочная жидкость, содержащая несвязанный 99mТс-эксаметазим, была максимально полностью отобрана из пробирки, для чего используют иглу с широким каналом.
18.Осторожно вращая для перемешивания, ресуспендировать смесь лейкоцитов, меченную 99mТс, в 5-10 мл супернатанта, полученного в пункте 6.
19.Измерить радиоактивности клеток и надосадочной жидкости из пункта 17. Рассчитать эффективность процесса внесения метки в процентах, которая определяется как отношение активности в клетках к сумме активностей в клетках и надосадочной жидкости.
Рекомендации. Эффективность процесса внесения метки зависит от количества лейкоцитов у больного и колеблется в зависимости от объёма пробы отобранной крови. При использовании объемов, указанных в пункте 2. предполагаемая эффективность процесса внесения метки [LE] составит около 55 %.
20.Шприцем без иглы осторожно отобрать меченые клетки в пластиковый, негепаринизированный шприц и закрыть его стерильным колпачком. Измерить радиоактивность.
21.После этого меченые клетки готовы к введению, которое следует провести без промедления.
Примечания: Для приготовления 1 л смеси раствора лимонной кислоты - цитрата декстрозы, следует перенести 22 г тринатрия цитрата. 8 г лимонной кислоты, 22.4 г декстрозы в градуированную колбу и довести объём водой для инъекций до 1,0 литра. Все операции проводить с соблюдением методов асептики. Стерилизовать путем фильтрования через Миллипоровский фильтр (0,2 мкм). Хранить при комнатной температуре. Допускается использование готового промышленного раствора, который необходимо хранить в соответствии с рекомендуемыми производителем условиями и использовать до истечения срока годности.
Приготовление 6 % гидроксиэтилкрахмала также следует проводить с соблюдением методов асептики. Допускается использование готового промышленного раствора, который необходимо хранить в соответствии с рекомендуемыми производителем условиями и использовать до истечения срока годности.
Важно, чтобы меченые лейкоциты тщательно отмывались перед введением их пациенту.